· polyakrylamidGél musí akrylamidovým monomérom, polymerizáciou východiskového materiálu, katalyzátorom a právom na zmes soli a pufra.
· akrylamida BIS (N, N '- metylénový dvojitý akrylamid) je gélová matrica monomérovej formy.
· Amónny persulfát začína adhezívny polymerizačný proces. Formulácia lepidla vyžaduje 10% roztok persulfátu amónneho pripraveného vo vode. Väčšina informácií naznačovala potrebu aktívneho použitia. 10% roztok sa však môže umiestniť na 4 ℃ na niekoľko týždňov bez výraznej straty aktivity. Vyrobte až 10 ml a zlikvidujte, keď sa lepidlo nezhromažďuje.
Tip: PercentoakrylamidPri sekvenovaní lepidla a proteínového lepidla nie je rovnaké. Ak používate Premade Acrylamid: BIS Riešenie, nezabudnite získať správnu fľašu.
· TEMED (N, N, N ', N'- Tetrametylyléndiamín) je katalyzátor v hnedej fľaši umiestnenej v chladničke. Pridajte tesne pred naliatím lepidla.
· Polyakrylamidová elektroforéza použitá sklo v elektroforéze by sa mala premyť pred a po zakaždým. Po elektroforéze umyte mäkkou kefou a látkou v horúcej mydlovej vode, opláchnite destilovanou vodou a stojan na suchý.
· Vlhkosť a prach môžu spôsobiť dutý polymér. Pred elektroforézou vyčistite sklenenú dosku čistiacim prostriedkom na sklenenie a utrite ju mäkkou kefou. Umyte sa destilovanou vodou a dôkladne osušte pomocou papiera. Opláchnutie so 70% etanolom pred utretím papierom pomáha čistiť a zrýchliť sušenie. Postupne pridajte vzorky akrylamidu: BIS, voda, roztok pufra, persulfát amónneho, TEMED. Dobre pretrepte a okamžite nalejte.
Pred polymerizáciou nie je potrebné odplyniť polyakrylamid. (Akrylamid bol umiestnený vo vákuu na odstránenie bublín, pretože kyslík inhibuje polymerizáciu.)
Vzorky vzorky horizontálneho lepidla.
· Vložte kúsok čierneho papiera do spodnej škatule, čierne pozadie, aby ste urobili jasnejšie ukážku.
· Lepkárová nádrž naplnená pufrom, tesne nad koloidom.
· Ak má hrana svetlo, zapnite svetlá, nechajte svetlo svietiť koloidom. Vzorku vtiahnite do pipety.
· Používanie automatického pipetovacieho zariadenia.
· V 10-200 MU 1 sa môže pohybovať kvapalina kvapaliny vo väčšine bodov na vzorke. Pre veľmi malé otvory vzorky (menej ako 10μ1) je dlhá pipetová hlava použitá na sekvencovanie lepidla pohodlnejšia.
· Pipeting práve ponorené do vzorky, vdýchnutie pomaly pohybujúcej sa tekutiny. Vzorka sa môže javiť ako lepkavá s glycerínom a rýchle čerpanie môže do pipetovej hlavy vtiahnuť vzduchové bubliny.
· Vzorky po vdýchnutí pipetovacej hlavy sa jemne pohybujú hlavou kvapaliny na okraji potrubia alebo utieracieho papiera sať tekutú hlavu z kvapôčok. Dávajte pozor, aby ste vzorku nenašli.
Vložte vzorku do otvoru vzorky
· Pipettingové zariadenie, aby ste udržali malý tlak, urobte vzorky mierne pohybujúce sa pretečovacou kvapalinou.
· Pipetingová hlava vložená do pufra, o niečo vyššia ako bodové otvory, udržiava pozitívny tlak. Špička pipety sa môže vložiť do malého otvoru.
· Pomaly a neustále vzorky von. Špička pipety je umiestnená nad otvorom vzorky bodu a vzorka sa ponorí do otvoru. Namiesto toho, aby ste sa tlačili, nechajte vzorku vyplniť otvor vzorky.
· Po poslednej kvapke vzorky s tekutou hlavou sa kvapalina presunie na druhú nohu, pomaly zdvihne pohyb kvapaliny, presuňte sa z pufra
Ako robiť vertikálne odber vzoriek lepkavých?
· Vzorka vertikálneho lepidla Vzorka Vytvorená medzi dvoma kusmi skla. Vo veľmi tenkom lepidle sa pipetová hlava nemôže vložiť ani medzi dve sklenené doštičky. Sledujte glycerín! Vložte hlavu pipety na otvor vzorky a vzorka sa ponorí do otvoru.
· Bodová vzorka Predtým, nezabudnite vložiť vertikálny bod otvoru vzorky polypropylénu acyl gélu, ktorý je čistý. Umyte nepolymerizovaný akrylamid a vodu, ktorá sa môže objaviť na spodnej časti otvoru vzorky. Voda môže výrazne zmenšiť otvor vzorky. Použite 25 ml alebo 50 ml injekčnú striekačku a ihlu s rozmermi 18. Nalejte do elektroforézového pufra a opatrne prepláchnite otvor vzorky.
· Môže byť ťažké vidieť otvor vzorky, ale zvyšok je ľahký. Ak existujú prebytočné otvory, vzorový pufer sa môže testovať pomocou bromofenolovej modrej.
Čas príspevku: mar-31-2023