Bezpečnostné opatrenia pre elektroforézu na polyakrylamidovom géli

· polyakrylamidgélový mušt akrylamidový monomér, východiskový polymerizačný materiál, katalyzátor a zmes soli a pufra.

· akrylamida BIS (N,N'-metylénový dvojitý akrylamid) je gélová matrica vo forme monoméru.

· persíran amónny spúšťa proces adhéznej polymerizácie.Formulácia lepidla vyžaduje 10% roztok persíranu amónneho pripravený vo vode.Väčšina informácií naznačovala potrebu aktívneho používania.Avšak 10% roztok môže byť umiestnený pri 4 °C na niekoľko týždňov bez výraznej straty aktivity.Doplňte do 10 ml a zlikvidujte, keď lepidlo neagreguje.

Tip: Percentoakrylamidv sekvenčnom lepidle a proteínovom lepidle nie je to isté.Ak používate vopred pripravený roztok akrylamidu: BIS, uistite sa, že máte správnu fľašu.

· TEMED (N,N,N',N'-tetrametyletyléndiamín) je katalyzátor, v hnedej fľaši, umiestnený v chladničke.Pridajte tesne pred naliatím lepidla.

· polyakrylamidová elektroforéza použité sklo pri elektroforéze by sa malo pred každým a po ňom umyť.Po elektroforéze umyte mäkkou kefou a handrou v horúcej mydlovej vode, opláchnite destilovanou vodou a nechajte uschnúť.

· Dutý polymér môže spôsobiť vlhkosť a prach.Pred elektroforézou očistite sklenenú dosku čistiacim prostriedkom na sklo a utrite ju mäkkou kefkou.Umyte destilovanou vodou a dôkladne osušte papierovou utierkou.Oplachovanie 70% etanolom pred utretím papierom pomáha vyčistiť a urýchliť schnutie.Postupne pridajte vzorky akrylamidu: BIS, vodu, tlmivý roztok, persíran amónny, TEMED.Dobre pretrepte a ihneď nalejte.

Polyakrylamid nie je potrebné pred polymerizáciou odplyňovať.(Akrylamid bol umiestnený vo vákuu, aby sa odstránili bubliny, pretože kyslík inhibuje polymerizáciu.)

Vzorové hroty horizontálneho lepeného bodu.

· do spodnej škatule vložte kúsok čierneho papiera, čierne pozadie, aby ste vytvorili vzorový otvor, aby ste videli jasnejšie.
· Nádrž na lepidlo naplnená tlmivým roztokom tesne nad koloidom.
· ak má okraj svetlo, zapnite svetlá, nechajte svetlo svietiť koloidne.Natiahnite vzorku do pipety.
· pomocou automatického pipetovacieho zariadenia.
· v 10-200 μl kvapaliny je možné použiť pohyblivý bod vo väčšine bodov na vzorke.Pre veľmi malé otvory pre vzorky (menej ako 10μ1) je vhodnejšia dlhá pipetovacia hlava používaná na sekvenovanie lepidla.

· pipetovanie práve ponorené do vzorky, vdychovanie pomaly sa pohybujúcej tekutiny.Vzorka sa môže zdať lepkavá od glycerínu a rýchle čerpanie môže nasať vzduchové bubliny do hlavy pipety.

· Vzorky po vdýchnutí pipetovacej hlavice budú jemne pohybovať tekutinovou hlavicou na okraji trubice alebo utierací papier nasáva tekutinu hlavicou mimo kvapôčok.Dávajte pozor, aby ste vzorku nenasali.

Vložte vzorku do otvoru na vzorku

· pipetovacie zariadenie na udržanie malého tlaku, aby sa vzorky mierne pohybovali prepadovou kvapalinou.
· pipetovacia hlava vložená do tlmivého roztoku, mierne vyššie ako bodové otvory, udržiava pozitívny tlak.Špičku pipety je možné vložiť do malého otvoru.
· pomaly a rovnomerne odoberajte vzorky.Špička pipety sa umiestni nad otvor bodovej vzorky a vzorka sa ponorí do otvoru.Namiesto zatláčania nechajte vzorku klesnúť, aby sa vyplnila otvor na vzorku.
· po poslednej kvapke vzorky s kvapalinovou hlavou sa kvapalina presunie do druhej vetvy, pomaly zdvihne kvapalinu, presunie sa z pufra

Ako urobiť vertikálny odber vzoriek lepidla?

· vertikálne otvory pre vzorky lepidla vytvorené medzi dvoma kusmi skla.Vo veľmi tenkom lepidle sa hlava pipety nedá ani vložiť medzi dve sklenené dosky.Pozor na glycerín!Nasaďte hlavu pipety nad otvor vzorky a vzorka sa ponorí do otvoru.
· bod vzorky predtým, uistite sa, že vertikálny bod polypropylén acyl gél vzorka otvor je opláchnutý čistý.Zmyte nezpolymerizovaný akrylamid a vodu, ktorá sa môže objaviť na dne otvoru na vzorku.Voda môže výrazne zmenšiť otvor na vzorku.Použite 25 ml alebo 50 ml injekčnú striekačku a 18-gauge ihlu.Nalejte tlmivý roztok na elektroforézu a opatrne prepláchnite otvor na vzorku.
· môže byť ťažké vidieť otvor vzorky, ale zvyšok je zároveň jednoduchý.Ak existujú prebytočné otvory, vzorkový pufor sa môže testovať pomocou brómfenolovej modrej.